抗体制备时如何设计理想的免疫原？

在抗体制备过程中，免疫原是影响抗体质量的最重要因素之一。
Ø 首先确认序列并通过访问NCBI等多个数据库来检索相关信息；
Ø 运用多种专业软件，评估稀有密码子、蛋白表达状态对抗体制备的影响，综合分析蛋白的保守结构域、特异性、B细胞线性表位、信号肽、跨膜结构域、亲水性等多种属性，初步筛选合适的抗原区域；
Ø 针对相关基因组/蛋白质数据库进行高级BLAST，进一步筛选候选抗原序列，以避免不期望的序列同源性并使潜在的抗体交叉反应性最小化；
Ø 必要时进行同源物/直系同源物/同种型的多重蛋白比对；
Ø 查找相关文献，是否有相关参考序列；
Ø 根据制备抗体的相关经验，最终确定设计抗原的理想区域。
像ABclonal，多年来一直专注于抗体平台与蛋白平台建设，不断引进先进的抗体和蛋白技术优化两大平台。

一、多克隆抗体的制备一般包括以下几个步骤：
1、制备抗原。
2、选择实验动物。
3、动物免疫。
4、试取血进行测试，看看是否成功免疫。
5、如果成功免疫，杀死实验动物，采集全部血清。
6、纯化出抗体。
7、鉴定抗体。包括纯度以及特异性。
二、抗体分类
抗原通常是由多个抗原决定簇组成的，由一种抗原决定簇刺激机体，由一个B淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体称之为单克隆抗体（Monoclone antibody）。由多种抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体，机体内所产生的抗体就是多克隆抗体；除了抗原决定簇的多样性以外，同样一类抗原决定簇，也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五类抗体。多克隆抗体是由异源抗原（大分子抗原、半抗原偶联物）刺激机体产生免疫反应，有机体浆细胞分泌的一组免疫球蛋白。多克隆抗体由于其可识别多个抗原表位、可引起沉淀反应，制备时间短，成本低的原因广泛应用于研究和诊断方面。
三、免疫方法
可以采用以下各种方法之一进行免疫。
（1）淋巴结法：①在兔的两后足跖部皮下（或皮内）活卡介苗 50mg（每侧约0.30ml） 。7～10 天后，兔跖及腘肌淋巴结肿大；②于肿大的两侧淋巴结内各加有完全佐剂的IgG 乳化抗原 0.50ml(含 IgG 5mg/ml、青霉素 1 000U/ml、链霉素 1 000μg/ml)；③必要时，14 天后，重复步骤②一次；④再过 7 天后，于两侧淋巴结内各加有完全佐剂的 IgG 乳化抗原0.50ml（含IgG5mg/ml、青霉素 1 000U/ml、链霉素 1 000μg/ml） ；⑤5～7天后，耳静脉采血。测定血清效价。
（2）皮下多点法：①家兔两侧掌（跖内各含有完全佐剂抗原 0.10ml（IgG 含量5mg/ml） ；②7～10 天后，脊柱两侧多点（颈、胸、腰椎各两点、共 6 点）皮下含不完全佐剂5的抗原，每点 0.50ml；③7～10 天后，脊柱两侧重复一次；④7～10 天后试血。不合格者重复步骤③。
（3）多途径联合法：①两侧掌（跖）内侧皮下含完全佐剂抗原 0.50ml（IgG 量为 5mg/ml） ；②14 天后，多点皮下含有不完全佐剂抗原；③7 天后，耳静脉不含佐剂的抗原 2ml；④测定血清抗体效价，不合格者重复步骤③，并适当递增 IgG 量。